Mi az ELISA Microplate Reader?
A mikrolemez-leolvasó, azaz az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat egy speciális eszköz az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálathoz. Valójában egy speciális fotoelektromos koloriméter vagy spektrofotométer álruhában, és működési elve alapvetően megegyezik a fő szerkezettel és a fotoelektromos koloriméterrel. Egyszerűen két kategóriába osztható, félautomata és teljesen automata, de működési elveik alapvetően megegyeznek. Magja egy koloriméter, vagyis a kolorimetriás módszerrel az antigén- vagy antitest-tartalmat elemzik. Az ELISA meghatározáshoz általában 250 μL-nél kisebbnek kell lennie a tesztoldat végső térfogatának, és a tesztet nem lehet elvégezni általános fotoelektromos koloriméterrel, ezért speciális követelmények vonatkoznak a mikrolemez-leolvasóban található fotoelektromos koloriméterre.
Elv
A mikrolemez-olvasó valójában egy speciális célú fotoelektromos koloriméter vagy spektrofotométer álruhában, működési elve pedig alapvetően megegyezik a fő szerkezettel és a fotoelektromos koloriméterrel. Az ábrán egy egycsatornás automatikus mintavevő mikrolemez-leolvasó munkája látható. Sematikus ábrája. A fényforrás lámpa által kibocsátott fényhullámot a szűrő vagy monokromátor monokromatikus fénnyé alakítja, és a műanyag mikropórusos pólusban jut be a vizsgált mintába. A monokromatikus fény egy részét a próbatest elnyeli, másik részét a megvilágított mintán keresztül továbbítja a fotodetektorhoz, a fotodetektor a vizsgálandó minta különböző fényjeleit megfelelő elektromos jelekké alakítja. Az elektromos jelek feldolgozása előerősítéssel, logaritmikus erősítéssel és analóg-digitális konverzióval történik. Lépjen be a mikroprocesszorba az adatfeldolgozáshoz és a számításhoz, végül jelenítse meg az eredményeket a kijelzőn és a nyomtatón. A mikroprocesszor vezérli a mechanikus meghajtó mechanizmus X és Y irányú mozgását is, hogy a mikrolemezt a vezérlőáramkörön keresztül mozgassa az automatikus mintavételezési folyamat megvalósítása érdekében. Más mikrolemez-leolvasók a mikrolemez kézi mozgatását használják a detektálásra, így a mechanikus hajtás és a vezérlő áramkör X és Y irányban kimarad, így kisebb a műszer és egyszerűbb a szerkezet.
A mikrolemez egy átlátszó műanyag lemez, amelyet kifejezetten a vizsgálandó minta elhelyezésére használnak. A lemezen több sor, egyenletes méretű kis lyuk található, és a megfelelő antigén vagy antitest be van ágyazva a lyukba. Minden kis lyukba néhány tíz milliliter oldat fér bele.
A fény egy elektromágneses hullám. A 100-400 nm közötti hullámhosszt ultraibolya fénynek, a 400 és 780 nm közötti fényt az emberi szem, a 780 nm-nél nagyobb hullámhosszt infravörös fénynek nevezzük. Az emberek csak a színeket látják, mert a fény eléri a tárgyat, és visszaverődik a tárgyról. A zöld növények zöldek, mert a legtöbb növény elnyeli a vörös-narancssárga és a kék-lila fényt, de nem nyeli el és nem tükrözi vissza a zöldet, ezért a növények zöldnek tűnnek. A mikrolemez-leolvasó mérés elve az analit abszorbanciájának kimutatása egy adott hullámhosszon.
Szerkezet
Vannak 40 lyukú lemezek, 55 lyukú lemezek, 96 lyukú lemezek stb. Különböző műszerek különböző nyílásos lemezeket használnak, amelyek egyenként vagy soronként tesztelhetők.
A mikrolemez-leolvasó által használt monokromatikus fény egy koherens szűrőn vagy ugyanazon a monokromátoron keresztül nyerhető, mint a spektrofotométer. Ha szűrőt használunk szűrőeszközként, akkor az megegyezik egy közönséges koloriméterrel. A mikrolemez elé vagy a mikrolemez mögé helyezhető. A kondenzátor után a membrán eléri a reflektort, a reflektor 90°-ban visszaveri, és függőlegesen halad át a kolorimetriás oldaton, majd a szűrőn keresztül továbbítja. A fotocellához.
A mikrolemez-leolvasó működési blokkvázlata és fényút-diagramja alapján látható, hogy a következő különbségek vannak a hagyományos fotoelektromos koloriméterekhez képest:
(L) A vizsgálandó kolorimetriás oldat tartálya már nem küvettát, hanem műanyag mikrolemezt használ. A mikrolemez általában átlátszó polietilén anyagból készül, amely erős adszorpciós hatást fejt ki az antigénre és az antitestre, ezért használják Szilárd fázisú hordozóként működik.
⑵Mivel a mintát tartalmazó műanyag mikrolemez többsoros porózus, a fény csak függőlegesen tud áthaladni, így a mikrolemez-leolvasó fénysugara a vizsgálandó oldaton, a mikrolemezen pedig függőlegesen halad át. A fénysugár lehet fentről lefelé, vagy áthaladhat a kolorimetriás folyadékon alulról felfelé.
⑶ A mikrolemez-leolvasók általában nem csak A-t használnak, hanem néha az optikai sűrűség OD-t is használják az abszorbancia kifejezésére. A mikrolemez-olvasók két típusra oszthatók: egycsatornás és többcsatornás, az egycsatornás pedig két típusra osztható: automatikus és kézi. Automatikus műszertípus X és Y irányban mechanikus hajtómű található, amely az L mikrolemez kis lyukait egyenként a sugár alá tudja küldeni tesztelésre, a kézi típus pedig a mikrolemez kézi mozgását használja a méréshez.
Az egycsatornás mikrolemez-leolvasó alapján egy többcsatornás mikrolemez-leolvasót fejlesztettek ki. Az ilyen típusú mikrolemez-leolvasók általában automatizáltak. Nem rendelkezik több nyalábbal és több fotodetektorral, mint például egy 12 csatornás műszer 12 nyalábbal vagy 12 fényforrással, 12 detektorral és 12 erősítővel, a mechanikus hajtómű X irányú hatása alatt 12 mintát érzékel egy sor. A többcsatornás mikrolemez-olvasó észlelési sebessége gyors, de felépítése A bonyolultabb árak is magasabbak.
Mikrolemez olvasó alkalmazási köre
Hematológiai teszt Thrombocyta-kapcsolódó antitest teszt PAIgA, PAIgG, PAIgM
D-dimer meghatározása D-dimer
Szérum fibrin degradációs termékek FDP meghatározása
T3, T4 meghatározása trijódtironinnal és tetrajódtironinnal
Immunológiai teszt C-reaktív fehérje meghatározás CRP
Immunglobulin IgD, IgE meghatározása
A keringő immunkomplexek meghatározása CIC
Rheumatoid faktor IgG, IgA, IgM RF meghatározása
Anti-thyreoglobulin antitest, mikroszomális antitest meghatározás TG, TM
Tumorrák immunológiai kimutatás Alfa-fetoprotein meghatározás AFP
A karcinoembrionális antigén CEA meghatározása
Prosztata specifikus antigén PSA meghatározása
Hasnyálmirigyrák, epeúti rák, gyomorrák meghatározása CA19-9
A petefészekrák meghatározása CA125
Az emlőrák meghatározása CA15-3
A méhnyak laphámsejtes karcinóma SCC meghatározása
Többszörös csontvelőrák kimutatása
A pajzsmirigyrák hTG meghatározása
Fertőző betegségek immunológiai vizsgálata, hepatitis A szerológiai teszt, anti-HAV-IgM
Hepatitis B szerológiai teszt Két és fél pár
Hepatitis C szerológiai kimutatás Anti-HAV-IgG, anti-HCV-IgM
Hepatitis D szerológiai kimutatása Anti-HDV-IgG, anti-HDV-IgM
A hepatitis E szerológiai kimutatása Anti-HEV-IgG
Hemorrhagiás láz elleni antitestek kimutatása vese-szindrómával HFRS-IgG
A japán encephalitis vírus IgM antitestének kimutatása
Humán immunhiány vírus ellenanyagainak kimutatása (azaz regionális AIDS) HIV β 2 M
Prenatális és posztnatális gondozás funkcióteszt Toxoplasma vírus teszt TOXO
Rubeola vírus kimutatása RV
Citomegalovírus kimutatása CMV
Herpes simplex vírus kimutatása Anti-HSV (Ⅰ, Ⅱ)
Mások genetikai vizsgálatokat és állati maradványokat, növényvédőszer-maradványokat stb. is végezhetnek.
